技術(shù)文章
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原理介紹Biacore是基于表面等離子共振(SPR)原理開發(fā)的新型生物分析傳感技術(shù),進行實時,無標記互作分析。該技術(shù)的關(guān)鍵是利用基于SPR現(xiàn)象發(fā)展的生物傳感器作為檢測系統(tǒng)。一般情況下,當(dāng)入射光以臨界角入射到兩種不同透明介質(zhì)的界面時將產(chǎn)生全反射,且反射光強度在各個角度上都應(yīng)相同。但若在介質(zhì)表面上鍍一層金屬薄膜后,由于入射光可引起金屬中自由電子的共振,從而導(dǎo)致反射光在一定角度內(nèi)大大減弱,其中使反射光*消失的角度稱作共振角(SPRAngel)。共振角會隨金屬薄膜表面通過的液相的折射...
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數(shù)字PCR突變檢測介紹數(shù)字PCR(digitalPCR,dPCR)通過將微量樣品進行微滴化處理,即稀釋和分液,直每個細分樣品中所含有的待測分子數(shù)一般不超過1(0或1)個,將含有核酸分子的反應(yīng)體系分成成千上萬個納升級的微滴。再將所有微量樣品在相同條件下進行PCR擴增反應(yīng),使含有目標分子的微量樣品中的目標分子增加成千上萬倍,產(chǎn)生強的熒光信號,后對發(fā)生了擴增反應(yīng)的微量樣品進行統(tǒng)計,有熒光信號的微滴判讀為1,沒有熒光信號的微滴判讀為0,根據(jù)泊松分布原理及陽性微滴的個數(shù)與比例即可得出靶...
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TaqMan探針法是針對DNA上的SNP位點設(shè)計PCR引物和TaqMan探針,進行實時熒光PCR擴增檢測的方法,通常用于少量SNP位點的分析,核酸定量分析以及腫瘤細胞突變分析等。探針的5’-端和3’-端分別標記一個熒光報告基團(Reporter,如FAM、VIC、HEX等)和一個熒光淬滅基團(Quencher,如TAMRA、BHQ1等)。當(dāng)熒光探針保持完整時,5′-端報告基團經(jīng)儀器光源激發(fā)的熒光正好被近距離的3′端熒光基團淬滅,儀器檢測不到5′端報告基團所激發(fā)的熒光信號。PC...
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細胞STR分型介紹細胞STR分型(celllineSTRgenotyping)也稱為短串聯(lián)重復(fù)序列(shorttandemrepeat,STR)分型、簡單重復(fù)序列(SSR)分型或微衛(wèi)星標記(Microsatellite)分型,是檢測廣泛分布在真核生物基因組中的簡單重復(fù)序列。一般由2-6bp的核心序列串聯(lián)重復(fù)而成,構(gòu)成了STR基因座的遺傳多態(tài)性。對于一個特定的個體,染色體上某個特定位置的重復(fù)序列的重復(fù)次數(shù)是固定的,而對于不同的個體重復(fù)次數(shù)可能不同,這就構(gòu)成了人群中STR的多態(tài)性...
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SNaPshot基因分型技術(shù)是由美國ABI公司開發(fā)的一種基于熒光標記單堿基延伸鏈終止反應(yīng)原理的分型技術(shù),主要針對中小通量的SNP分型項目。簡單說來,在一個含有測序酶、四種熒光標記ddNTP、緊臨SNP位點5’-端的不同長度延伸引物和模板DNA的反應(yīng)體系中,引物延伸一個堿基即終止,經(jīng)ABI3730XL測序儀檢測后,根據(jù)峰的位置確定該延伸產(chǎn)物對應(yīng)的SNP位點,而根據(jù)峰的顏色可得知摻入的堿基種類,從而確定該樣本的基因型。同時,通過多重PCR反應(yīng)體系,可以同時檢測多種SNP位點,通常...
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